Year: 2001
Type: dissertation
Abstract: Die Methyltransferase aus Thermus aquaticus katalysiert die Übertragung einer Methylgruppe vom Cofaktor SAM auf die exozyklische Aminogruppe des Adenins innerhalb der Sequenz 5´-TCGA-3´ in doppelsträngiger DNA. Die Sequenzspezifität von M·TaqI wurde mit Hilfe eines in vitro Spezifitätstests untersucht, der zeigte, daß M·TaqI, verglichen mit anderen Methyltransferasen, sehr spezifisch ist. Weiterhin wurde eine flexible Schleife nahe der DNA-Bindungstasche von M·TaqI untersucht (AS 110-120). Durch einen Alanin-Scan wurde ein für die Funktion des Enzyms wichtiger Tyrosinrest an Position 117 detektiert. Die Mutante Y117A zeigte eine verminderte Aktivität sowohl in vitro als auch in vivo. Mittels kompetitiver Titrationen wurde gezeigt, daß die Affinität der Mutante Y117A zur Sequenz 5´-TCGA-3´ geringer ist als die des Wildtyps zu dieser Sequenz. Abschließend wurde die Bewegung der Schleife während der DNA-Bindung mit einer Dansyl-markierten Mutante in Stopped-Flow-Experimenten untersucht.
Authors: Almut Friederich, Elmar G. Weinhold
Language: German
Subfield: Molecular Biology
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W1578434779