Caracterização do sintase do óxido nítrico de Leishmania infantum
Year: 2010
Type: dissertation
Abstract: O óxido nítrico (NO) desempenha um papel fundamental nos processos de sinalização e infecção por parasitas, tais como tripanossomatídeos. É produzido por uma família de enzimas designados por sintases do óxido nítrico (NOS). Estudos prévios indicam que existe produção de NO em várias espécies de Leishmania, mas nunca foi demonstrada a existência do enzima NOS nem do gene que o codifica nestes organismos. O presente trabalho permitiu identificar um gene que codifica para um NOS de Leishmania infantum, tendo-se expressado a proteína recombinante em bactérias E. coli e optimizado o processo de purificação desta proteína de 64 kDa. A sua actividade enzimática depende de vários cofactores de NOS conhecidos, como FAD, FMN, tetrahidrobiopterina (BH4), calmodulina e cálcio. A tetrahidrobiopterina, uma molécula importante no processo de infecção por Leishmania, modula a actividade do LiNOS de uma forma cooperativa. Determinou-se que o Km para o substrato deste enzima é de 0,9 μM, quando este é pré-incubado com BH4, e que este possui uma actividade específica de 3,8 nmol.min-1.mg-1, sendo a constante catalítica de 4,1 x 10-3 s-1. A expressão do LiNOS em promastigotas foi confirmada por peptide mass fingerprint, mostrando que este enzima deverá ser importante para o ciclo celular do parasita. Este é o primeiro gene NOS e enzima NOS identificados e caracterizados num tripanossomatídeo. Uma vez que os genes NOS de tripanossomatídeos não apresentam semelhanças significativas com os genes NOS de humanos, os enzimas NOS de tripanossomatídeos podem tornar-se possíveis alvos terapêuticos.
Author: Filipa Simplício da Silva
Language: Portuguese
Field: Medicine
Domain: Health Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W2229015509