Year: 2013
Type: article
Abstract: Streszczenie Do nadprodukcji rekombinowanych białek wykorzystywane są zarówno eukariotyczne, jak i prokariotyczne systemy ekspresyjne.Wybór odpowiedniego systemu zależy m.in.od tempa wzrostu komórek gospodarza i sposobu ich hodowli, poziomu ekspresji genu docelowego oraz obróbki potranslacyjnej syntetyzowanego białka.Niezależnie od rodzaju systemu ekspresyjnego, jego podstawowymi elementami są wektor i gospodarz ekspresyjny.Najczęściej stosowanym układem do nadprodukcji białek, zarówno na skalę laboratoryjną jak i przemysłową, jest system prokariotyczny.System ten oparty jest przede wszystkim na bakteriach E. coli, chociaż coraz częściej wykorzystuje się bakterie z rodzaju Bacillus.System prokariotyczny pozwala na uzyskanie w krótkim czasie dużych ilości rekombinowanych białek.Prosta i tania hodowla komórek bakterii oraz dobrze poznane mechanizmy transkrypcji i translacji ułatwiają zastosowanie tych mikroorganizmów.Łatwość modyfikacji genetycznych i dostępność wielu mutantów bakteryjnych jest dodatkowym atutem systemu prokariotycznego.W pracy scharakteryzowano elementy strukturalne prokariotycznych wektorów ekspresyjnych.Omówiono także strategie przygotowania genu białka docelowego zwiększające wydajność jego produkcji, ułatwiające detekcję oraz oczyszczanie rekombinowanego białka i nadające mu aktywność.Scharakteryzowano szczepy bakteryjne najczęściej wykorzystywane jako komórki gospodarza w systemach ekspresyjnych oraz potencjalne umiejscowienie heterologicznego białka.Znajomość podstawowych elementów prokariotycznego systemu ekspresji pozwala na uzyskanie aktywnych biologicznie białek w krótkim czasie i w satysfakcjonujących ilościach. nadprodukcja białek • wektor ekspresyjny • znacznik • E. coli • Bacillus SummaryFor overproduction of recombinant proteins both eukaryotic and prokaryotic expression systems are used.Choosing the right system depends, among other things, on the growth rate and culture of host cells, level of the target gene expression and posttranslational processing of the synthesized protein.Regardless of the type of expression system, its basic elements are the vector and the expression host.The most widely used system for protein overproduction, both on a laboratory and industrial scale, is the prokaryotic system.This system is based primarily on the bacteria E. coli, although increasingly often Bacillus species are used.The prokaryotic system allows one to obtain large quantities of recombinant proteins in a short time.A simple and inexpensive bacterial cell culture and well-known mechanisms of transcription and translation facilitate the use of these microorganisms.The simplicity of genetic modifications and the availability of many bacterial mutants are additional advantages of the prokaryotic system.In this article we characterize the structural elements of prokaryotic expression vectors.Also strategies for preparation of the target protein gene that increase productivity, facilitate detection and purification of recombinant protein and provide its activity are discussed.Bacterial strains often used as host cells in expression systems as well as the potential location of heterologous proteins are characterized.
Language: Polish
Subfield: Genetics
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W2275157152