Year: 1992
Type: article
Abstract: Генноинженерная биотехнология УДК 579.252.55Μ. Ф. Алексеев КЛОНИРОВАНИЕ В ГЕНЕ Lac Iq ПЛАЗМИД СЕРИИ pTTQ: «ОБРАТНАЯ» ЦВЕТНАЯ РЕАКЦИЯ Предложен метод клонирования MluI-, BclI-, ApaI-, BssHI-и EcoRV-фрагментов ДНК в гене IaeIq плазмид серии pTTQ.Рекомбинантные клоны отбираются как окрашенные в синий цвет колонии на чашках, содержащих ампициллин и X-gal.Введение.Плазмиды pUC18 и pUC19 представляют собой чрезвычайно удобные для клонирования векторы.Основное их преимуществоналичие полилинкера, включающего 13 уникальных сайтов рестрикции внутри α-фрагмента гена β-галактозидазы, что значительно облегчает селекцию рекомбинантных клонов, которые могут быть отобраны на чашках с IPTG и X-gal как бесцветные колонии на фоне окрашенных нерекомбинантных [1] при клонировании в штаммах Escherichia coli с генотипом Δ (lac-pro), F'lacIqZAM15.Однако сайты внутри полилинкеров плазмид pUC18 и pUC19 далеко не перекрывают весь спектр известных в настоящее время рестриктаз.В частности, в этих полилинкерах отсутствуют сайты узнавания для рестриктаз MluI f BclI f ApaI f BssHI t EcoRV.Предлагается простой метод клонирования MluI-, BclI-, ApaI-, BssHI-и £со7?У-фрагментов ДНК в гене IaeIq плазмид серии pTTQ с использованием «обратной» цветной реакции. Материалы и методы.В работе использовали: штамм Е. coli JM109, recAl, endAl, hsdR17, gyrA96, thi, supE44, relAl, λ-, A(lac-proA, Β), F', traD36, proA, В, lacIqZAM15 [2]., ДНК фага лямбда, рестриктаза EcoRV y ДНК-лигаза фага Т4, X-gal производства НПО «Биопол» (Москва).Выделение плазмидной ДНК, рестрикцию и лигирование осуществляли, как описано в [3].Результаты и обсуждение.Недавно Старк сообщил о создании
Source: Biopolymers and Cell
DOI: 10.7124/bc.000343
Author: M. F. Alexeyev
Language: English
Subfield: Genetics
Domain: Life Sciences
Open Access status: diamond
OpenAlex ID: W2334082815