Struktura, biološka aktivnost i interakcije sa proteinama fikocijanobilina i hromopeptida C-fikocijanina iz cijanobakterije Arthrospira platensis
Year: 2017
Type: dissertation
Abstract: Arthrospira (Spirulina), fotosintetska filamentozna cijanobakterija, koristi se u ishrani čovjeka od davnina. To je jedan od najbogatijih izvora proteina i esencijalnih amino kiselina, kao i izvanredan izvor vitamina, makro- i mikro-elemenata, esencijalnih masnih kiselina, pigmenata, glikolipida i polisaharida. C-fikocijanin (C-PC), najzastupljeniji protein u Spirulini, je u vodi rastvoran heterodimerni molekul koji se odlikuje intezivnom fluorescencijom. Njegova plava boja potiče od kovalentno vezane (tioetarskom vezom) tetrapirolne hromofore fikocijanobilina. Jedan molekul PCB-a je vezan za α subjedinicu preko cisteinskog ostatka 84, dok β subjedinica vezuje dva molekula hromofore preko cisteinskih ostataka 82 i 153. Brojne studije su pokazale da C-PC ima značajne antoksidativne, anti-inflamatorne, imunomodulatorne i antikancerogene efekte. Štaviše, PCB per se ispoljava različite biološke aktivnosti koje mogu poboljšati zdravlje ljudi. U literaturi ne postoje podaci o strukturi i bioaktivnosti digestijom oslobođenih peptida sa vezanom hromoforom (hromopeptida), kao ni informacije o vezivanju PCB-a za humani (HSA) i goveđi (BSA) serum albumin, glavne proteine plazme i model sisteme za proučavanje protein-ligand interakcija.Prvi dio ove doktorske disertacije imao je za zadatak ispitivanje digestibilnosti (C-PC-a) pepsinom, kao i određivanje strukture i ispitivanje bioaktivnih svojstava hromopeptida dobijenih nakon digestije C-PC-a, izolovanog i prečiščenog iz komercijalnog praha Arthrospira platensis. SDS-PAGE pod redukujućim uslovima je pokazala da se hromoprotein brzo digestuje pepsinom u simuliranoj želudačnoj tečnosti. HPLC analiza digesta je pokazala postojanje pet dominantnih hromopeptidnih frakcija. Struktura oslobođenih hromopeptida je određena primjenom tandemske masene spektrometrije i peptidi, sa varijacijom u veličini od 2 do 13 aminokiselinska ostatka, su identifikovani u obje subjedinice C-PC-a. Utvrđeno je da sve hromopeptidne frakcije ispoljavaju odličnu antioksidativnu (ORAC esej i test ukupne redukujuće moći) i Cu2+-helirajuću aktivnost (studija gašenja fluorescencije), kao i značajne citotoksične efekte (MTT esej vijabilnosti) na ćelijskim linijama humanog cervikalnog adenokarcinoma i epitelnog kancera kolona. Zaključeno je da digestija pepsinom oslobađa biološki aktivne hromopeptide iz C-PC-a, čija je aktivnost u najvećoj mjeri zasnovana na njihovom antioksidativnom potencijalu.U drugom dijelu ove disertacije, najpre je okarakterisano vezivanje (prethodno izolovanog) PCB-a za HSA, a zatim je ispitan uticaj liganda na stabilnost proteina...
Author: Simeon Minić
Language: sh
Subfield: Molecular Biology
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W2610297568