Caracterização da proteína Pic (protein involved in colonization) em Escherichia coli enteropatogênica atípica.
Year: 2015
Type: dissertation
Abstract: Proteínas denominadas autotransportadoras (AT) têm sido identificadas em Escherichia coli patogênicas, sendo frequentemente associadas a atributos de virulência, tais como adesão, agregação, invasão, formação de biofilme e toxicidade.A serinoprotease Pic (protein involved in colonization) é uma dessas AT, a qual foi originalmente identificada em E. coli enteroagregativa (EAEC), Shigella flexneri 2a e E. coli uropatogênica.Em EAEC a proteína Pic apresenta papel importante na colonização da mucosa intestinal através de suas atividades de degradação de muco intestinal e indução de sua secreção.Um estudo prévio, que teve como objetivo analisar a prevalência de fatores de virulência de outros patótipos de E. coli diarreiogênicas em amostras de E. coli enteropatogênica atípicas (aEPEC), detectou uma cepa (BA589) portando o gene pic.Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo caracterizar a proteína Pic produzida pela cepa de aEPEC BA589, através da determinação da sua estrutura genética e atividades biológicas in vitro e in vivo.A análise por Southern blot mostrou que pic em BA589 está presente em um plasmídeo de alto peso molecular (~98 kb) e o sequenciamento desse gene mostrou identidade de 99% com pic de EAEC 042.Pic da cepa BA589 (Pic 589 ), purificada por gel filtração a partir de sobrenadantes de cultura, foi capaz de clivar mucina isolada de glândula submaxilar bovina e hemaglutinar eritrócitos de coelho.Além disso, Pic 589 promoveu a clivagem direta de moléculas que participam das três vias sistema complemento (C1q, C2, C3 e C4).A cepa BA589 foi mutagenizada pelo sistema lambda-red, originando o mutante BA589Δpic.Esse mutante perdeu as capacidades de degradação da mucina, hemaglutinação e clivagem de proteínas do sistema complemento.O papel de Pic 589 na colonização intestinal foi avaliado no modelo de camundongos tratados com estreptomicina.A cepa selvagem foi capaz de colonizar o intestino, o que não foi observado com o mutante BA589Δpic.A análise da colonização intestinal por microscopia eletrônica de varredura mostrou uma elevada produção de muco nos camundongos infectados pela cepa selvagem e o ceco foi a região do intestino onde houve maior colonização.Em resumo, Pic 589 possui atividades hemaglutinante e mucinolítica, promove a inativação das três vias do sistema complemento e medeia a colonização intestinal de camundongos, preferencialmente na região do ceco.Desta forma, a serinoprotease Pic representa um fator de virulência adicional na cepa de aEPEC BA589, relacionada às etapas de adesão, colonização e evasão do sistema imune inato.
Author: Afonso Gomes Abreu Junior
Language: Portuguese
Subfield: Microbiology
Field: Immunology and Microbiology
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W2292294839