Detecção Por Sequenciamento De Sanger De Variantes Genéticas No Gene Tpmt Que Predispõem À Toxicidade Por Tiopurinas: Uma Estratégia Aplicada À Rotina De Diagnóstico Molecular Da Leucemia Linfoide Aguda
Year: 2026
Type: article
Study design: Observational Study
Abstract: Introdução A 6-mercaptopurina (6-MP) é um dos principais medicamentos empregados na fase de manutenção do tratamento da leucemia linfoide aguda (LLA) pediátrica. Entretanto, polimorfismos no gene TPMT influenciam seu metabolismo e estão associados ao aumento do risco à toxicidade. Atualmente, a identificação dessas variantes é realizada, predominantemente, por testes genéticos direcionados, como a PCR alelo-específica, que investigam apenas os SNPs mais recorrentes. Como consequência, alterações raras, específicas de determinadas populações ou novas variantes com potencial impacto funcional, podem permanecer não identificadas. Objetivos Propor uma nova estratégia molecular para investigação de variantes genéticas no gene TPMT em pacientes pediátricos com LLA, visando identificar alterações funcionais que possam contribuir para o aprimoramento da estratificação de risco à toxicidade por tiopurinas. Material e Métodos Trata-se de um estudo de coorte longitudinal retrospectivo, envolvendo pacientes diagnosticados com LLA-B atendidos no Hospital da Criança de Brasília José Alencar (HCB) entre 2023 e 2025. O RNA total foi extraído, convertido em cDNA e submetido à amplificação por PCR utilizando primers específicos para o gene em questão. Os produtos amplificados foram sequenciados pelo método de Sanger e analisados por softwares de bioinformática, com classificação dos fenótipos conforme as diretrizes do CPIC. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CAAE: 44796221.9.0000.0144). Resultados Após o desenho e validação dos primers específicos, foram analisadas noventa amostras de pacientes com LLA-B. Destas, nove apresentaram genótipo compatível com metabolizador normal (wild-type), doze com metabolizador intermediário (seis portadores do diplótipo TPMT*1/*3A e seis do diplótipo TPMT*1/*3C) e uma apresentou resultado indeterminado (TPMT*1/*24). Adicionalmente, a variante TPMT:c.474C>T foi identificada em 81 amostras, tanto em heterozigose quanto em homozigose, corroborando sua elevada frequência na população estudada e seu caráter não funcional, uma vez que não está associada à alteração da atividade enzimática da TPMT ou ao metabolismo da 6-mercaptopurina. Discussão e Conclusão Os resultados obtidos demonstram a aplicabilidade do sequenciamento de cDNA como estratégia complementar aos testes farmacogenéticos convencionais para análise do gene TPMT. Além de permitir a identificação dos principais SNPs associados ao metabolismo das tiopurinas, a metodologia possibilita a investigação de variantes ao longo de toda a região codificante do gene, favorecendo a detecção de alterações raras ou potencialmente funcionais que podem não ser detectadas por testes direcionados. Dessa forma, a abordagem apresenta potencial para ampliar a caracterização farmacogenética de pacientes com LLA e contribuir para uma estratificação mais abrangente do risco de toxicidade à tiopurinas.
Institution: Universidade de Brasília
Language: English
Subfield: Pharmacology
Domain: Life Sciences
Open Access status: diamond
OpenAlex ID: W7223112922