Quimiogenômica Funcional Baseada Em Crispr/cas9 Identifica Determinantes Genéticos Da Resposta À Cromomicina A2 Em Leucemias Agudas
Year: 2026
Type: article
Abstract: Introdução A manutenção da homeostase celular depende da integração entre programas de transcrição gênica, progressão do ciclo celular, adaptação ao estresse e morte celular programada. A desregulação desses processos constitui uma característica central das leucemias agudas e representa uma oportunidade para a identificação de novas vulnerabilidades terapêuticas. A cromomicina A2, membro da família dos ácidos aureólicos, liga-se a regiões ricas em GC do DNA e interfere na regulação transcricional, porém seus mecanismos de ação em neoplasias hematológicas permanecem pouco compreendidos. Objetivos Identificar determinantes genéticos responsáveis pela resposta celular à cromomicina A2 em leucemias utilizando rastreamento genômico por CRISPR/Cas9. Material e métodos Células NALM6 expressando Cas9 induzível foram transduzidas com uma biblioteca CRISPR/Cas9 contendo 278.754 sgRNAs direcionados a todo genoma (RefSeq). Após indução das deleções gênicas por doxiciclina, as células foram cultivadas na ausência ou presença de cromomicina A2 (0,7 nM). O crescimento celular foi monitorado periodicamente, seguido de extração de DNA genômico, amplificação das sequências de sgRNAs, sequenciamento de nova geração e análise dos resultados pelo algoritmo CRANKS. Os resultados foram integrados aos estudos funcionais previamente realizados, incluindo viabilidade celular, apoptose, clonogenicidade, microscopia eletrônica, expressão gênica e immunoblotting. Resultados A cromomicina A2 apresentou potente atividade antileucêmica em modelos celulares, induzindo remodelamento autofágico precoce, atraso na progressão da fase S, apoptose e acúmulo de γH2AX. O rastreamento por CRISPR identificou genes cuja perda aumentou significativamente a sensibilidade à cromomicina A2, destacando componentes das vias de reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (ERCC1, ERCC4, ERCC5 e XPA), resposta ao estresse replicativo (SLFN11), apoptose mitocondrial (APAF1, BAK1 e CASP9), proteostase (FAF2, MBTPS2, UBQLN1, PLAA e RTCB) e metabolismo celular (GFPT1, GMPPB, KDSR, SLC4A7 e AHCYL1). Esses resultados indicam que múltiplos processos celulares contribuem para a resposta citotóxica induzida pela cromomicina A2. Discussão A identificação de genes envolvidos no reparo de DNA, apoptose, proteostase e metabolismo demonstra que a atividade antitumoral da cromomicina A2 depende da integração de diferentes vias responsáveis pela manutenção da homeostase celular. Esses achados corroboram os resultados funcionais obtidos anteriormente e fornecem novas evidências sobre os mecanismos moleculares associados à resposta ao tratamento. Conclusão O rastreamento funcional por CRISPR/Cas9 revelou vulnerabilidades genéticas associadas à resposta à cromomicina A2 em leucemias agudas, destacando vias de reparo de DNA, estresse celular e apoptose como determinantes da sensibilidade ao composto. Esses resultados ampliam a compreensão do mecanismo de ação da cromomicina A2 e identificam potenciais biomarcadores e alvos terapêuticos para futuras estratégias em neoplasias hematológicas.
Language: English
Subfield: Hematology
Field: Medicine
Domain: Health Sciences
Open Access status: diamond
OpenAlex ID: W7223139515