Validação Da Leitura Semiautomatizada Da Metodologia Hibridização in Situ Por Fluorescência Para a Sonda Pml/rara
Year: 2026
Type: article
Abstract: A Leucemia Promielocítica Aguda (LPA) é um subtipo de leucemia mieloide aguda caracterizado por rápida evolução clínica e elevado risco de complicações hemorrágicas potencialmente fatais. Quando diagnosticada precocemente, apresenta altas taxas de resposta a terapia alvo. O diagnóstico é confirmado pela detecção da t(15;17)(q24;q21) no cariótipo e fusão gênica PML::RARA por Hibridização in situ por Fluorescência (FISH) e/ou PCR. Em nosso serviço, a leitura da técnica de FISH é realizada de forma manual em microscópio de fluorescência por dois analistas treinados. Atualmente, a leitura semiautomatizada (captura automatizada com revisão manual dos sinais por célula) está sendo implantada para diferentes sondas. Este estudo teve como objetivo validar a leitura do FISH para a fusão PML::RARA por metodologia semiautomatizada visando sua aplicação na rotina laboratorial. O FISH, utilizando a sonda PML/RARA (MetaSystems), foi processado conforme a rotina laboratorial (Kishimoto et al.). A captura automatizada foi realizada pelo equipamento Metafer 4, com revisão das imagens pelo software Cell Review. Para o desenvolvimento do classificador, a configuração do fabricante foi otimizada segundo critérios relacionados aos sinais fluorescentes, incluindo parâmetros para detecção das células (concavidade celular, circunferência, eixo Z, intensidade dos sinais e espaço entre aqueles de mesma fluorescência). Foram utilizados oito casos verdadeiramente negativos (células sem clonalidade detectada por citometria de fluxo) e cinco casos verdadeiramente positivos para fusão PML::RARA, confirmados por cariótipo e FISH, provenientes de pellets citogenéticos obtidos em 2025 e conservados em solução de Carnoy. A análise semiautomatizada foi padronizada de acordo com Borri et al. Foi realizado o teste de precisão do equipamento pela repetibilidade dos casos negativos por 20 vezes, totalizando 16.000 núcleos provenientes destas repetições e 500 núcleos provenientes dos casos positivos. Os valores de referência (VR) foram definidos pela função BETA.ACUM.INV (Microsoft Excel), considerando intervalo de confiança de 95%. Os resultados da análise semiautomatizada foram comparados aos da leitura manual, adotada como método de referência. O classificador para a sonda PML/RARA apresentou desempenho eficaz tanto na detecção celular quanto dos sinais fluorescentes. Todos os cinco casos positivos foram corretamente identificados pela análise semiautomatizada, incluindo os padrões típicos (1R1G2F) e variantes (1R1G1F e 2R1G1F). Os resultados indicam que o sistema semiautomatizado apresenta desempenho concordante com o método de referência, sendo assim aprovado para sua aplicação na rotina diagnóstica. A automação de processos leva a ganho de precisão e capacidade de recuperação de todas as etapas laboratoriais.
Institution: Hospital Israelita Albert Einstein
Language: English
Subfield: Molecular Biology
Domain: Life Sciences
Open Access status: diamond
OpenAlex ID: W7223144726