Validação E Implementação De Um Ensaio De Genotipagem Para Antígenos Do Sistema De Grupo Sanguíneo Colton Por Reação Em Cadeia Da Polimerase Em Tempo Real
Year: 2026
Type: article
Abstract: Introdução O sistema de grupo sanguíneo Colton é composto por quatro antígenos expressos na glicoproteína Aquaporina 1, codificada pelo gene AQP1, localizado no cromossomo 7p14.3. Os antígenos Co(a) e Co(b) são antitéticos, sendo o Co(a) de alta frequência e o Co(b) de baixa frequência. Os alelos CO*A e CO*B, responsáveis pela expressão dos antígenos Co(a) e Co(b), diferem entre si pelo polimorfismo de nucleotídeo único c.134C>T (rs28362692). Embora incomuns, os anticorpos dirigidos contra esses antígenos pertencem predominantemente à classe IgG e podem estar associados a reações transfusionais hemolíticas e à doença hemolítica do feto e do recém-nascido. A genotipagem eritrocitária torna-se particularmente útil diante da disponibilidade limitada de antissoros para determinação fenotípica, na investigação de anticorpos anti-Colton e na seleção de hemocomponentes compatíveis. Objetivos Validar o ensaio de genotipagem por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan® para determinação dos alelos CO*A e CO*B, visando sua implementação no Laboratório de Genotipagem Eritrocitária da Fundação Hemocentro de Brasília. Material e métodos A genotipagem foi realizada no equipamento QuantStudio™ 5 Real-Time PCR System utilizando ensaios Applied Biosystems™ TaqMan™ SNP Genotyping Assays marcados com os fluoróforos VIC® e FAM®, conforme instruções do fabricante, sendo os resultados analisados no software QuantStudio™ Design & Analysis. O DNA genômico foi quantificado em espectrofotômetro NanoDrop™ One, padronizado para concentração de 20 ng/µL e utilizado na quantidade de 1 µL por reação, em volume final de 10 µL. Para avaliação da acurácia do ensaio, utilizou-se 40 amostras previamente genotipadas por serviços de referência em imuno-hematologia, representando os genótipos CO*A/CO*A, CO*A/CO*B e CO*B/CO*B. A reprodutibilidade foi determinada pela análise, em duplicata, de 92 amostras distribuídas em placas independentes e processadas por operadores distintos. Também foram avaliados call rate e quality score, adotando-se como critérios de aceitação de concordância ≥ 99%, reprodutibilidade de 100%, call rate ≥ 90% e quality score ≥ 95%. Resultados O ensaio apresentou 100% de concordância entre os genótipos obtidos e aqueles previamente determinados pelos serviços de referência. A análise em duplicata das 92 amostras demonstrou 100% de reprodutibilidade entre diferentes placas e operadores. Todas as amostras foram classificadas automaticamente pelo QuantStudio™ Design & Analysis Software v1.5.1 (call rate de 100%), sem ocorrência de resultados inconclusivos. O quality score foi superior a 98% em todas as análises, excedendo o critério mínimo de aceitação de 95%. Discussão O atendimento de todos os critérios previamente estabelecidos para validação analítica demonstra que o ensaio apresenta elevada robustez e confiabilidade para determinação dos alelos CO*A e CO*B, oferecendo uma ferramenta molecular complementar quando a caracterização fenotípica é limitada pela disponibilidade restrita de reagentes sorológicos comerciais. Conclusão O ensaio mostrou-se apto para implementação na rotina do Laboratório de Genotipagem Eritrocitária da Fundação Hemocentro de Brasília, permitindo ampliar o painel de genotipagem eritrocitária disponível para suporte à investigação imuno-hematológica e à seleção de hemocomponentes compatíveis.
Institution: Universidade Federal de Uberlândia
Language: English
Topic: Blood groups and transfusion
Subfield: Hematology
Field: Medicine
Domain: Health Sciences
Open Access status: diamond
OpenAlex ID: W7223146504