Conséquences de l'échange de domaines évolutivement éloignés sur l'activité et la géométrie de la NADPH-cytochrome P450 réductase.
Year: 2010
Type: dissertation
Abstract: Les cytochromes P450 (P450) et la NADPH-cytochrome P450 reductase (CPR) sont les principaux acteurs du métabolisme des xénobiotiques chez les mammifères. La CPR est une protéine multidomaine formée de deux domaines catalytiques comprenant les cofacteurs FAD et FMN, et reliés par un domaine de connexion. Grace aux propriétés rédox de ses deux flavines, la CPR est capable de scinder le flux diélectronique du NADPH en deux transferts monoélectroniques vers les P450. Jusqu alors, la CPR avait toujours cristallisée dans une conformation dite fermée, compatible avec un transfert interne du FAD au FMN, mais dans laquelle le FMN été tellement enfuit au cœur de la protéine qu un transfert externe vers les P450 était inenvisageable. Le projet de cette thèse consistait à construire et analyser les caractéristiques structurales et biochimiques de CPR chimères constituées de domaines issues des CPR humaine et de levure. Ces chimères sont toujours fonctionnelles vis-à-vis d accepteurs artificiels et naturels. De plus, la structure cristallographique de l une d elle a pu être déterminée à 2,5 Å de résolution et dans une nouvelle conformation dites ouverte. Celle-ci prouve le caractère dynamique de cette protéine multidomaine, et pourrait correspondre à la conformation de la CPR au sein du complexe bimoléculaire CPR-P450 lors du transfert externe entre le FMN et le cytochrome. Les facteurs pouvant influencer ou dicter ces changements conformationnels ont été appréhendés grâce à des analyses d enzymologie, de cinétiques rapides, de potentiométrie ou encore de dénaturation.
Source: HAL
Author: Louise Aigrain
Institution: Centre de Génétique Moléculaire
Language: French
Subfield: Structural Biology
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W2314844366