Year: 2019
Type: dissertation
Abstract: AGRADECIMENTOS À minha família, especialmente minha mãe, cujo apoio é essencial para a realização de todos os meus sonhos, sendo a pessoa responsável por tudo que consegui conquistar na minha vida até hoje.Aos colegas, técnicos e professores da Universidade Federal de Uberlândia que, direta ou indiretamente, contribuíram para realização deste trabalho.Especialmente à Laysa, que tanto me escutou durantes estes 2 anos de trabalho, e à Carol, do curso de graduação em Biotecnologia, e às técnicas Carla e Vanessa, que muito me auxiliaram nas atividades no laboratório.À minha orientadora desta jornada, que, sempre com muita paciência, sensibilidade e sabedoria, me guiou durantes estes anos de aventura na biologia molecular.Não há palavras para descrever todo o meu carinho e gratidão.E a todos que de alguma forma contribuíram para a realização deste trabalho.RESUMO O Cerrado é a savana mais rica do planeta em biodiversidade, sendo considerado um dos 35 hotspots mundiais, ou seja, áreas prioritárias para conservação pela alta taxa de degradação e número de espécies endêmicas.Diversas espécies do bioma também possuem potencial para aproveitamento econômico, para fins alimentícios, madeireiros, ornamentais e medicinais.Porém, as plantas do Cerrado são geralmente ricas em metabólitos secundários, especialmente compostos fenólicos, os quais dificultam a extração de DNA em quantidade e qualidade suficiente para análises moleculares, essenciais para programas de conservação ou melhoramento.Os métodos de extração descritos até hoje muitas vezes não se adequam às características destas espécies e/ou são demorados, caros e utilizam reagentes tóxicos.Neste contexto, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento de um novo e eficiente método para extração de DNA de plantas do Cerrado, de maneira mais rápida, barata e segura, bem como a comparação do tempo e custos envolvidos no protocolo aqui descrito e naqueles já testados para espécies vegetais do bioma.Nosso método, baseado no uso conjunto de SDS e Triton X-100, dispensa a necessidade de múltiplas etapas de purificação e reduz o uso de reagentes caros e/ou tóxicos.Para os testes, foram selecionadas 10 espécies representativas do bioma Cerrado.A qualidade e quantidade do DNA extraído foram analisadas por espectrofotômetro e em gel de agarose e a sua adequabilidade para estudos moleculares avaliada através de digestão com enzima de restrição e amplificação via PCR com marcador RAPD.O DNA obtido pelo nosso método apresentou-se íntegro, livre de contaminantes e excelente para digestão e amplificação via PCR.A concentração média do DNA entre as espécies testadas variou de 156 a 1166 ng.µL - 1 e a relação A 260 /A 280 de 1,78 a 1,92.O nosso protocolo também se mostrou mais rápido e barato, quando comparado com os métodos de extração de DNA já testados para espécies do bioma.Portanto, o protocolo apresentado aqui será uma importante ferramenta para análises moleculares de espécies do Cerrado.
Author: Diego Cerveira de Souza
Language: Portuguese
Subfield: Molecular Biology
Domain: Life Sciences
SDG: Life on land
Open Access status: gold
OpenAlex ID: W2948859151