Etudes structurales de l'export nucléaire de l'ARNt
Year: 2003
Type: dissertation
Abstract: Ce travail a porté sur l'étude structurale du complexe Exportine-t:RanGTP:ARNt. L'exportine-t est le facteur d'export nucléaire de l'ARNt. Elle appartient à la famille des karyopherines, des transporteurs nucleo- cytoplasmiques composés d'un grand nombre de motifs hélicaux de type HEAT. Pour former un complexe actif d'export nucléaire, l'exportine-t nécessite la petite GTPase Ran, alors que dans le cas de l'import nucléaire (importines), l'interaction avec Ran dissocie le complexe d'import. Ce projet s'est développé selon deux axes: l'étude à basse résolution des changements conformationels subits par les karyopherines lors de leur interaction avec Ran et/ou leur cargo, et l'obtention de la structure du complexe d'export de l'ARNt à haute résolution, dans le but de comprendre les bases moléculaires du processus d'export. Des expériences de diffusion centrale ont révélé pour l'importine beta (la référence chez les karyopherines) et l'exportine-t des changements conformationels importants, entre une conformation étendue à l'état libre et une conformation très compacte à l'état lié (à Ran ou au cargo). Ces résultats contrastent avec ceux obtenus pour la transportine, une autre importine, qui conserve une conformation étendue à l'état libre comme à l'état lié. L'ARNt a aussi pu être positionné dans l'enveloppe basse résolution du complexe ternaire d' export. Parallèlement, j'ai travaillé à l'expression, la purification et la cristallisation du complexe d'export de l'ARNt. J'ai identifié des constructions minimales de Ran et de l'ARNt et stabilisé le complexe. Trois formes cristallines ont pu être obtenues, l'une d'entre elles diffractant potentiellement à 3.5 A. Néanmoins, plusieurs difficultés ont empêché l'enregistrement d'un jeu de données complet à cette résolution. Les cristaux sont difficiles à reproduire et leur diffraction varie grandement d'un cristal à l'autre. Leur diffraction est aussi anisotropique. Ces cristaux sont actuellement en cours d'optimisation.
Author: N. Fukuhara
Language: French
Subfield: Molecular Biology
Domain: Life Sciences
Open Access status: green
OpenAlex ID: W598706152